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重组FLAG标签的筛选、鉴定及与新型荧光蛋白的融合表达
发表时间：2010-10-15 浏览量：2859 下载量：1247
| 全部作者： | 易科，高晓莲 |
| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院；中南大学湘雅医院中国医学遗传学国家重点实验室 |
| 摘 要： | 以FLAG标签的原始序列DYKDDDDK（FLAG4）为模板，设计4种新FLAG标签与新型绿色荧光蛋白（G2）、红色荧光蛋白（H10）融合。Western blotting分析表明，抗FLAG单克隆抗体M2（AFM2）能够特异识别G2-FLAG4，G2-FLAG5，H10-FLAG3，H10-FLAG4，H10-FLAG5等5种FP-FLAG融合蛋白。采用非竞争性ELISA固相法，计算出FP-FLAG融合蛋白与单克隆抗FLAG M2抗体(AFM2)的亲和常数。结果表明，FLAG原始序列与AFM2之间的亲和力最高，FLAG5和FLAG3次之，FLAG1和 FLAG2不能与AFM2特异识别。在FLAG融合蛋白的纯化应用中，运用这些FLAG标签的亲和力差异，在同一纯化体系下通过设计不同的洗提次序和洗提条件，可以达到逐步分离不同目的物的效果。 |
| 关 键 词： | 多肽与蛋白质生物化学；重组FLAG标签；新型荧光蛋白；非竞争性ELISA；亲和常数 |
| Title： | Construction, expression and characterization of fusion proteins consisting of novel fluorescent protein and recombinant FLAG tag |
| Author： | YI Ke, GAO Xiaolian |
| Organization： | College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University; State Key Laboratory of Medical Genetics of China, Xiangya Medical School, Central South University |
| Abstract： | Based on FLAG-tag initial sequence （FLAG4: DYKDDDDK）, designed four new FLAG tags and fused with H10 and G2. Western blotting was employed and the result showed that monoclonal antibody ANTI-FLAG M2 (AFM2) interacted specifically with five kinds of FP-FLAG fusion protein(G2-FLAG4, G2-FLAG5, H10-FLAG3, H10-FLAG4, H10-FLAG5).The functional affinity of FP-FLAG fusion protein and monoclonal antibody ANTI-FLAG M2 (AFM2) was determined by non-competitive ELISA. Results show that AFM2 against FLAG-tag initial sequence have the highest affinity, DYKDEDDK, DYKDYKDYK take the second place and DYKGGGYK is incapable of binding the antibody of AFM2. Using different affinity of these FLAG-tags, by designing different elution sequence and elution condition various FLAG fusion proteins can be gradually purified. |
| Key words： | peptide and protein biochemistry; recombination FLAG-tag; novel fluorescent proteins; non-competitive ELISA; affinity constant |
| 发表期数： | 2010年10月第19期 |
| 引用格式： | 易科，高晓莲. 重组FLAG标签的筛选、鉴定及与新型荧光蛋白的融合表达[J]. 中国科技论文在线精品论文，2010，3（19）：1983-1991. |
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